HCP 항체 적용 범위의 평가 방법은 일반적으로 2차원 전기영동(2-DE)과 단백질 면역블로팅(웨스턴 블롯) 기술, 즉 2D-웨스턴 블롯(2D-Western Blot)을 채택합니다. 현재, 2D-Western Blot의 2차원 형광 차이 겔 전기영동(2D-DIGE)은 다양한 형광 표지 및 형광 발색 방법을 사용하여 2차원 전기 영동 겔에서 HCP 항체 적용 범위를 검출하고 분석하는 데 일반적으로 사용됩니다. 이를 통해 평가의 정확성이 어느 정도 향상되어 시간과 시약 비용이 절약되었습니다. 그러나 전기영동 기반 기술은 고품질 전기영동 결과에 의존하고, 명확하게 염색된 단백질 스팟이 필요하며, 결과 분석 중 인간의 판단에 큰 영향을 미쳐 쉽게 신뢰할 수 없는 결과를 초래할 수 있습니다.
이 단계의 많은 프로토콜은 적용 범위 검출을 위해 2D-Western Blot(예: 2D-DIGE) 방법을 사용하고 HCP 항체 검출을 겔의 총 단백질 염색과 비교합니다. 이러한 유형의 적용 범위 분석을 사용하면 적용 범위의 백분율을 추정할 수 있으며 보다 구체적인 ELISA 또는 직교 분석(예: 질량 분석법)을 사용하도록 안내할 수 있습니다. 2-DE 방법을 고분해능 질량 분석법으로 대체하면 HCP 샘플에 포함된 단백질의 유형과 상대적 풍부함을 정확하게 식별할 수 있습니다. HCP 다클론 항체가 인식할 수 있는 단백질 유형과 결합하여 계산을 일치시키면 보다 현실적인 적용 범위를 얻을 수 있습니다. 질량 분석법은 HCP 다클론 항체에 의해 인식되는 HCP 단백질을 정성적 및 정량적으로 추가로 식별할 수 있습니다.